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PVDF膜與NC膜的區(qū)別

文章出處:卓越膜結(jié)構(gòu)作者:卓越網(wǎng)絡(luò)部發(fā)表時間:2020-11-26 10:39:23閱讀:
  PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白質(zhì)印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF膜是疏水性的,膜孔徑有大有小,隨著膜孔徑的不斷減小,膜對低分子量的蛋白結(jié)合就越牢固。硝酸纖維素膜又稱為NC膜, 在膠體金試紙中用做C/T線的承載體,同時也是免疫反應(yīng)的發(fā)生處。所以NC膜成為該試驗中更重要的耗材。那么PVDF膜與NC膜有什么區(qū)別呢?下面就請聽榮誠太湖塑業(yè)小編來給您介紹一下
  
  1. PVDF膜
  
  PVDF膜比較貴,但是做WB的“殺手锏”。與硝酸纖維素膜相比,PVDF膜在蛋白質(zhì)截留能力,機械強度和化學(xué)相容性上都更優(yōu)越的性能(Pluskal,et al.,1986)。市售硝酸纖維素膜的典型結(jié)合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜結(jié)合量是100-200μg/cm2(而結(jié)合強度PVDF比硝纖膜強6倍?。5荘VDF膜更大的優(yōu)點不僅于此:更好的機械強度和化學(xué)耐受性使PVDF膜在各種染色應(yīng)用和多重免疫檢測中成為理想選擇;而且單個凝膠的泳道復(fù)本可用于多種目的,如考馬斯亮藍染色后切出條帶并進行N-末端測序、蛋白消化/肽分離/內(nèi)部測序和免疫檢測(Kurien,et al.,2003)。特別是需要做N端蛋白測序,在相當“嚴酷”的清洗條件下,當尼龍或者硝纖膜已經(jīng)降解的情況下PVDF膜依然保持本色,笑傲江湖。所以PVDF也是要做蛋白測序的好的選擇。PVDF膜同樣分0.45um和0.2um的,后者孔徑小,對小分子蛋白有較好的攔截吸附,背景可能會比前者稍高。
  
  2. 硝酸纖維素膜(NC膜)
  
  硝酸纖維素膜是蛋白印跡更廣泛使用的轉(zhuǎn)移介質(zhì),對蛋白有很強的結(jié)合能力,而且適用于各種顯色方法,包括同位素,化學(xué)發(fā)光(Luminol類)、常規(guī)顯色、染色和熒光顯色;背景低,信噪比高。NC膜的使用也很簡便,比如不需要甲醛預(yù)處理,只要在無離子水面浸潤排出膜內(nèi)氣泡,再在電泳緩沖液中平衡幾分鐘就可以了;比如NC膜很容易封閉,也不需要特別嚴謹?shù)那逑礂l件。轉(zhuǎn)移到NC膜上的蛋白在合適的條件下可以穩(wěn)定保存很長時間,不過要注意的是純的硝纖膜在比較脆,又容易卷,操作要小心,不適合用于需要多次重復(fù)清洗的用途——因為經(jīng)不起多次“折磨”。選擇硝纖膜時要注意的是選擇合適的孔徑,通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔徑的膜,小于20KD的話建議選擇0.2um的,如果小于7KD的話更好選擇0.1um的膜。另外還要注意選擇純的NC膜——混有含醋酸纖維(CM)的NC膜結(jié)合力會有所降低。另外提醒一句:由于NC膜上結(jié)合的蛋白會因為一些去污劑而被代替,因此在封閉時更好使用較溫和的Tween20,而且濃度不要超過0.3%(據(jù)說0.05%效果更好)。

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